使用 dsGreen 对凝胶进行 DNA 染色

dsGreen 是一种特异性结合双链 DNA 的荧光染料。染色方案有三种变体：凝胶浸泡、凝胶预染色和样品预染色。

凝胶浸泡

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶的经典方法。

1. 在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中运行样品。

2. 在烧杯中，将 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE、TBE 或 TAE 缓冲液（对于小型凝胶），或将 50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE、TBE 或 TAE 缓冲液（用于中型凝胶）。用抹刀、棒或磁力搅拌器充分混合。

3. 将稀释的 dsGreen 溶液倒入适当的托盘或平底锅中，并浸没凝胶。

4. 将凝胶浸泡 5-10 分钟。

5. 使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯（365 nm），但这种光源的激发效率稍低。

凝胶预染色

该方法仅适用于琼脂糖凝胶，不适用于 PAAG。注意——这种染色方法有时会导致条带变形或形成污点。在这种情况下使用凝胶浸泡。

1. 使用微波炉或加热装置将缓冲液中的琼脂糖煮沸至溶解。

2. 在仍为液体时，每 10 mL 凝胶溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液。充分混合。

3. 倒入凝胶并使其凝固。

4. 为了获得最佳结果，在阳极附近每 10 mL 缓冲液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液（“+"，红线）。

5. 运行示例。可以在 254 nm 低压汞灯下实时监测迁移带。

6. 使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯（365 nm），但这种光源的激发效率稍低。

样品预染色

不敏感、且经济的方法。

1. 在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液。

2. 将 1 µL 溶液添加到每个要在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上分离的样品中。

3. 运行示例。可以在 254 nm 低压汞灯下实时监测迁移带。

4. 使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯（365 nm），但这种光源的激发效率稍低。