NanoTemper MST分子互作检测成套体系技术

NanoTemper MST分子互作检测成套体系技术

一、成套体系概述

本套NanoTemper MST微量热泳动分子互作检测系统配套体系由二代RED-NHS蛋白荧光标记试剂盒（MO-L011）与Premium抗吸附专用毛细管（MO-K025）组成，为MST分子亲和力检测的标准成套组合。整套体系实现蛋白荧光标记、样品纯化、抗吸附上样、仪器检测全流程标准化，解决传统实验中标记不稳定、背景噪音高、蛋白管壁吸附、数据重复性差、弱结合靶点无信号等行业痛点。广泛应用于药物靶点亲和力筛选、蛋白-小分子、蛋白-抗体、蛋白-多肽、膜蛋白互作、PROTAC分子评价等生命科学研究与创新药物研发领域。

整套配套设备仪器类型：MicroScale Thermophoresis (MST) Molecular Interaction Analyzer（Monolith / Dianthus全系红光机型）

二、成套组成清单及品类界定

本成套系统包含两大核心组件，品类区分明确，分别对应生化试剂与仪器专用耗材：

1. MO-L011 RED-NHS 2nd Generation 蛋白荧光标记试剂盒

品类：生化试剂 / 标记试剂盒

货号：MO-L011

用途：蛋白赖氨酸位点共价荧光标记、为MST检测提供稳定荧光信号源，属于实验反应核心试剂。

2. MO-K025 Monolith Premium Capillaries

品类：仪器一次性耗材

货号：MO-K025（200支/盒）

用途：MST上机检测专用样品承载毛细管，高分子抗吸附涂层，消除非特异性吸附，保障数据基线稳定。

三、MO-L011试剂盒核心技术参数与原理

1. 产品基础参数

• 染料体系：第二代 NT-647 RED-NHS 活化荧光染料（红光通道）

• 激发/发射波长：650 nm / 670 nm

• 适配蛋白：≥5 kDa，浓度 2–20 μM

• 反应次数：4次独立微量标记

• 标记方式：NHS-酯与蛋白赖氨酸伯氨基共价偶联

• 标记时长：30 min；全程实验≤60 min（含纯化）

• 标记度DOL：0.5–1.2

2. 技术原理

二代NT-647染料带有琥珀酰亚胺活性酯（NHS-Ester），在弱碱性无氨基缓冲体系中与蛋白表面赖氨酸残基发生特异性共价结合，形成稳定酰胺键。标记条件温和、不破坏蛋白构象与结合活性，荧光标记不可逆、无脱落，可满足长时间多点梯度MST检测。

3. 二代产品核心升级优势

• 荧光量子产率提升35%，信噪比显著提高

• 大幅改善弱亲和力（μM~mM）靶点信号振幅

• 降低染料非特异性吸附，基线平稳无漂移

• 标记均一性更强，批次重复性偏差＜10%

• 蛋白回收率稳定60%–90%，适合微量珍贵样品

四、MO-K025 Premium毛细管核心技术参数与优势

1. 产品参数

• 规格：200支/盒，一次性硼硅玻璃毛细管

• 单支上样体积：4–5 μL

• 内壁工艺：共价接枝中性高分子刷抗吸附涂层

• 适配机型：Monolith NT.115、Pico、Monolith X、Dianthus全系红光设备

2. 核心技术价值

Premium毛细管采用化学键合亲水涂层，屏蔽玻璃管壁负电荷，从根源解决蛋白、抗体、疏水多肽、膜蛋白、PROTAC小分子的非特异性吸附问题。相比普通Standard毛细管，可有效避免基线下降、曲线畸变、KD拟合偏差等常见实验问题，是高精度、弱结合、难测体系的必配耗材。

五、整套实验体系工作流程（标准化SOP）

第一步：蛋白样品准备（无Tris、无甘氨酸、无高浓度咪唑）

第二步：MO-L011系统荧光标记（染料:蛋白=3:1，避光30 min）

第三步：试剂盒自带脱盐柱纯化去除游离染料，获得纯标记蛋白

第四步：DOL标记度质控，筛选合格标记样品

第五步：MO-K025 Premium毛细管上机，避免吸附干扰

第六步：MST梯度检测与KD拟合分析

六、成套体系技术优势（整体协同优势）

• 光学匹配：NT-647染料光谱与仪器红光检测通道原厂校准，无串色、无杂峰

• 标记+抗吸附闭环：试剂盒保证标记质量，Premium毛细管保证上机稳定性，成套解决95%以上MST实验失败问题

• 适配疑难靶点：膜蛋白、疏水蛋白、弱结合小分子、多肽、抗体均可稳定检测

• 数据精度高：拟合R²普遍＞0.98，批次重复性佳

• 实验效率高：1小时完成标记纯化，当天出KD数据

• 体系标准化可溯源：全部为NanoTemper原厂标准配套，符合药物研发、SCI论文数据规范

七、适用研究场景

• 小分子药物靶点亲和力筛选与KD定量

• 抗体/抗原结合验证、亲和力排序、竞争结合实验

• 蛋白-蛋白、蛋白-多肽相互作用研究

• 膜蛋白、GPCR、离子通道体外互作分析

• PROTAC、脂溶性药物、弱亲和力体系研究

• 复杂基质（细胞裂解液、血清）分子互作检测

八、成套设备仪器标准填写信息（可直接用于申报）

Instrument Type：MicroScale Thermophoresis (MST) Molecular Interaction Analyzer

配套试剂：NanoTemper MO-L011 RED-NHS 2nd Generation 蛋白荧光标记试剂盒

配套耗材：NanoTemper MO-K025 Premium Capillaries（200 count）

九、供货

上海宝叶生物科技有限公司

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