Naveni® 原位近接连接技术：空间蛋白质互作研究新一代精准检测工具
一、技术概述
Naveni® 原位邻近连接技术（Naveni in situ Proximity Ligation Assay，简称 Naveni PLA）由瑞典 Navinci Diagnostics AB 基于经典邻位连接原理迭代开发，是当前空间蛋白质组学领域单分子级原位可视化检测技术，专门用于固定细胞、冰冻 / 石蜡组织切片中内源蛋白互作、蛋白翻译后修饰的定性、定位与定量分析。
传统免疫荧光仅能实现蛋白共定位，无法区分蛋白是否发生真实结合；Co-IP、FRET 等体外检测手段会破坏细胞天然空间结构、丢失亚细胞定位信息。Naveni PLA 突破上述短板，仅当两个靶蛋白空间距离＜40 nm（发生直接 / 间接相互作用）时才会产生特异性荧光信号，每个离散荧光点对应一组蛋白互作复合物，真正实现原位、内源、单分子、可定量检测，无需外源蛋白过表达，大程度还原细胞生理微环境真实分子状态。
核心工作原理（五步标准化反应流程）
整套反应依托 Navenibody 寡核苷酸偶联二抗、DNA 环化连接、滚环扩增（RCA）三重信号放大体系，特异性层层锁死，大幅降低非特异性背景：
样本封闭
专用封闭缓冲液封闭细胞 / 组织非特异性吸附位点，消除一抗、Navenibody 非特异结合，压低荧光背景。
双一抗靶向识别
选用两种不同宿主来源一抗，分别靶向两个互作蛋白（或同一蛋白两个不同表位），仅特异性结合内源靶标蛋白，不干扰蛋白天然构象。
Navenibody 探针结合
孵育 Navenibody（偶联专属寡核苷酸链的物种特异性二抗），分别结合两种一抗，携带可互补配对的 DNA 臂；主流型号 NaveniFlex Cell MR 适配小鼠 + 兔源一抗组合，覆盖绝大多数常规科研抗体。
邻近依赖 DNA 环化（特异性核心步骤）
只有两个 Navenibody 因蛋白相互作用空间靠近，两端寡核苷酸链才能互补配对，在连接酶作用下闭合形成环状 DNA 模板；无蛋白结合、单纯共定位不满足距离条件时，无法完成环化，无后续信号，从根源杜绝假阳性。
滚环扩增与荧光成像
聚合酶以环状 DNA 为模板启动滚环扩增，生成含上千重复序列的长链 DNA；加入 Atto647N/Red 荧光标记探针杂交，产生明亮、离散点状荧光信号，借助共聚焦、荧光显微镜完成成像与定量统计。
三、核心技术突出优势
1. 超高检测灵敏度，适配低丰度内源蛋白
依托 RCA 滚环扩增实现千倍级信号放大，可捕捉传统 IF 无法检出的低表达蛋白、瞬时弱蛋白互作、早期病理蛋白聚集体（如 α- 突触核蛋白聚集），无需质粒过表达改造细胞，规避外源标签干扰蛋白天然功能。
2. 特异性，无共定位假阳性
信号产生严格依赖 40 nm 以内分子邻近效应，仅真实蛋白结合事件发光；普通免疫荧光共染仅能证明蛋白同区域分布，无法判定相互作用，二者实验结论存在本质差异。
3. 完整保留空间信息，适配多类型生物样本
全程在固定完整细胞、组织切片原位完成检测，不裂解细胞、不破坏亚细胞分区；兼容贴壁细胞、细胞爬片、细胞甩片、FFPE 石蜡切片、冰冻组织，配套细分 **NaveniFlex Cell（细胞专用）、NaveniFlex Tissue（组织专用）** 两大试剂盒产品线。
4. Atto647N 近红外荧光低背景成像（主流推荐方案）
代表产品 NaveniFlex Cell MR Atto647N（货号 NC.MR.100/60017）搭载 Atto647N 荧光基团：激发 646 nm、发射 664 nm，属于远红外波段，避开细胞自发荧光区间，相比传统 Texas Red、Orange 荧光，背景噪音更低、光稳定性更强，适配共聚焦、STED 超高分辨显微镜、数字病理扫描仪，支持多通道复合染色（搭配 DAPI 核染）Navinci。
5. 结果可数字化定量，适配高通量筛选
荧光亮点可通过图像分析软件自动计数，量化蛋白互作丰度；试剂盒配套 96 孔板标准化实验方案，适用于药物干预高通量蛋白互作筛选、靶点抑制剂药效评价。
6. 对比初代 Duolink PLA 全面优化
Navinci 新一代 Naveni 体系优化缓冲液配方、探针特异性：石蜡组织染色无弥散雾状背景，阴性对照无杂信号；试剂稳定性提升，酶组分耐受反复冻融，同等实验条件下信噪比显著优于传统 Duolink 试剂盒
四、主流试剂盒产品线（科研高频选用型号）
1. NaveniFlex Cell 系列（细胞样本专用）
NC.MR.100（货号 60017）：Cell Atto647N，小鼠 + 兔一抗配对，100 次反应，近红外荧光，实验室采购量最高；
NC.MR.Red：Cell Red 红色荧光，小鼠兔配对，适配普通荧光显微镜；
NC.GR.100/NC.GM.100：山羊兔、山羊小鼠一抗组合，满足多抗体搭配需求。
2. NaveniFlex Tissue 系列（石蜡 / 冰冻组织专用）
3. 配套辅助试剂
NaveniLink：用户自有一抗偶联寡核苷酸试剂盒，实现直接 PLA 检测；NaveniControl Kit：专用阴阳性对照试剂盒，保障实验质控稳定。
五、全领域科研应用场景
1. 肿瘤生物学研究
1）肿瘤微环境膜蛋白互作：PD-1/PD-L1、整合素 - 粘附分子原位结合检测，评估免疫检查点激活水平；
2）肿瘤信号通路：β-catenin/E-cadherin、EGFR 下游激酶互作，解析增殖、侵袭转移分子机制；
3）靶向药物筛选：给药前后蛋白互作丰度定量，直观验证药物靶点抑制效果。
2. 神经退行性疾病机制
检测 α- 突触核蛋白、Tau 蛋白早期寡聚聚集，捕捉疾病发病前期微量病理分子事件，适用于阿尔茨海默、帕金森病理基础研究。
3. 细胞信号与翻译后修饰
原位检测蛋白磷酸化、泛素化、甲基化修饰：将修饰位点特异性一抗与总蛋白一抗配对，直接可视化蛋白修饰位点，替代体外 Western blot，直观展示修饰在细胞核 / 胞浆 / 膜上的分布差异。
4. 发育与干细胞生物学
干细胞分化过程中转录因子互作、细胞连接蛋白结合动态观测，解析细胞命运调控网络。
5. 免疫细胞互作研究
T 细胞、巨噬细胞表面受体配体原位结合检测，揭示免疫细胞活化、浸润分子基础。
六、实验质控与操作要点
样本分区处理：细胞固定选用 4% 多聚甲醛，避免甲醇过度通透破坏蛋白复合物；石蜡切片充分抗原修复，保证一抗结合效率。
试剂储存规范
Navenibody 探针、稀释缓冲液 2–8℃冷藏不可冷冻；连接酶、扩增聚合酶、Atto647N 荧光扩增液 - 20℃避光保存，分装减少反复冻融。
对照设置（实验有效）
阴性对照：去除其中一种一抗，无荧光亮点；阳性对照：试剂盒配套标准互作蛋白切片，可见大量离散荧光点。
成像参数
Atto647N 通道采用 Cy5 标准滤片组，降低曝光时间减少荧光淬灭，搭配 DAPI 蓝色核染实现双通道共定位成像。
七、技术总结
Naveni® 原位近接连接技术补齐传统蛋白互作检测手段的短板，集原位保留空间结构、单分子高灵敏、严格特异性、可数字化定量、低背景荧光成像五大优势于一体，是当前空间蛋白质组、肿瘤病理、神经科学、药物筛选领域不可替代的核心科研工具。其中 NaveniFlex Cell MR Atto647N（NC.MR.100/60017）作为细胞实验通用启动试剂盒，适配绝大多数常规鼠 / 兔一抗组合，成为国内高校、科研院所、第三方检测平台主流采购型号
更新时间：2026-07-16
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