Makler® 精子计数板技术综述 —— 以色列 Sefi‑Medical

摘要

Makler® 计数板由以色列 Sefi‑Medical Instruments 研发，是男科生殖科研领域经典的可重复使用精液分析计数腔室，腔室标称深度10 μm，支持未稀释精液直接上样，单次制片即可同步完成精子浓度计数与精子活力观察，广泛应用于人及动物精子生理学、生殖毒理、IVF 基础研究、精子冷冻保存评估等科研场景PMC。本文从结构原理、关键技术指标、操作流程、性能对比、误差来源、维护保养、科研应用等方面对该产品进行系统阐述。

关键词：Makler 计数板；精子浓度；精子活力；精液分析；男科科研；Sefi‑Medical

1 产品结构与工作原理

Makler® 计数板主要由不锈钢底座、石英定位顶针、蚀刻网格盖玻片、专用夹具四部分组成，全套货号SMI‑363；备用网格盖玻片配件货号 SMI‑364。四根高精度石英顶针将盖玻片撑起，形成固定高度10 μm样本腔室；盖玻片内侧蚀刻 1 mm² 正方形网格，网格划分为 10×10 共计 100 个 0.01 mm² 小方格。

计数换算规则：直接读取任意连续 10 个方格内精子总数，数值即为百万 /mL（×10⁶/mL），无需额外换算系数，省去稀释步骤，规避稀释带来的系统误差。10 μm 腔室高度刚好略大于精子头部尺寸，精子在腔室内形成单细胞层，精子可水平自由游动，全部细胞落在同一焦平面，显微镜下可同时统计浓度与运动活力，不需要分两次制片PMC。四点牛顿彩色干涉环为产品自带自检机制；盖上盖玻片后，四个顶针接触位置出现均匀彩色边纹，代表腔室放平、深度达标；若无彩色环，说明盖玻片倾斜，实验结果作废。

2 核心技术参数

表格

3 标准实验操作流程

1. 样本预处理：精液液化，充分轻柔混匀，避免产生气泡；计数前建议计数板 37 ℃预热 10 min，降低精子运动受低温影响。

2. 加样：吸取 5‑10 μL 精液滴加至计数板圆盘中心区域。

3. 迅速盖上带网格盖玻片，轻压，确认四个接触点出现均匀彩色干涉环；加样后必须快速加盖，延迟加盖会造成活精子定向聚集，浓度结果高估可达 30%，是 Makler 板最主要人为误差来源PMC。

4. 使用专用夹具将计数板固定于显微镜载物台，20× 相差物镜观察。

5. 计数：统计连续 10 个完整方格内精子头总数，直接得到精子浓度（×10⁶/mL）；同时直接镜检评估精子前向运动、总活力。

6. 实验完成后，立即使用无漂白类消毒液、纯水轻柔冲洗，镜头纸轻拭光学面，晾干后放回原装木盒保存，网格面禁止硬物刮擦。

4 与传统计数工具性能对比

4.1 对比改良 Neubauer 血细胞计数板

Neubauer 板腔室深度 100 μm，为血细胞设计；用于精子检测时必须对精液进行稀释，稀释过程引入操作误差；腔室深度过大，精子多层堆叠，很难同时观察活力与浓度，主要作为 WHO 参考方法用于手工浓度校准。Makler 优势：不稀释，一步完成浓度 + 活力检测，操作快速；劣势：对操作手法要求高，盖片延迟会带来显著偏差，不适合临床 IVD 诊断，仅限科研使用PMC。

4.2 对比一次性毛细管计数板（Leja 等）

一次性板适合 CASA 计算机辅助精子分析；Makler 为开放滴加式上样，更适合人工镜检，可反复使用，长期科研项目成本更低；但存在清洗不到位带来样本交叉污染风险，每批次实验需要严格清洗质控。

5 主要优势与方法学局限性

优势

1. 无需样本稀释，减少稀释、移液引入系统误差，适合快速批量科研样本筛查。

2. 10 μm 单层腔室，同一视野同时完成精子浓度计数、活力评估，一次加样获得两类核心指标。

3. 网格蚀刻在盖玻片上，显微镜目镜不需要额外加装网格附件。

4. 自带四点彩色干涉环自检，实验人员可现场判断腔室是否合格。

5. 可重复使用，适合长期动物繁育、生殖毒理大样本科研项目。

局限性（科研实验需要重点注意）

1. 开放滴加上样，加盖玻片延迟会造成活精子趋化聚集，浓度结果虚高，操作必须快速连贯。

2. 腔室深度随长期使用磨损发生偏移，需要定期性能核查；旧板深度漂移会直接影响计数结果。

3. 极低浓度样本（少精子、无精子样本）检出下限有限，不适用于极少量精子的精准确认实验。

4. 开放体系，样本易发生交叉污染；每一次使用完成后必须清洗消毒。

5. 该产品为科研 RUO 设备，不能直接用于临床诊断报告出具。

6 主要科研应用方向

1. 人类男科基础科研：精液生理、氧化应激、生殖毒理学；

2. 模式动物与家畜繁育研究：小鼠、大鼠、猪、牛等动物精子质量评估、冷冻‑复苏效果评价；

3. 生殖药理药物筛选：药物干预后精子浓度、活力变化评价；

4. 精子冻存库质量监控，体外受精基础研究。

7 维护保养与质量控制要点

1. 清洗仅允许使用无漂白消毒剂、去离子水；严禁 84、次氯酸钠漂白体系，严禁高压灭菌，漂白剂会腐蚀蚀刻网格。

2. 光学面仅使用高级擦镜纸，禁止纸巾、棉签直接摩擦网格区域。

3. 每次使用必须确认四点彩色干涉环，无彩色环直接废弃本次制片。

4. 长期使用定期使用已知浓度乳胶微球开展性能验证；网格磨损、划痕后及时更换备用盖玻片（货号 SMI‑364）。

5. 室温干燥原装木盒存放，防尘防磕碰。

8 总结

Sefi‑Medical Makler® 精子计数板凭借无需稀释、浓度活力同步检测的特点，在全球生殖科研实验室得到广泛引用。该方法学有明确的操作边界，实验人员需要严格控制加样‑加盖时间，做好清洗质控，规避人为带来的系统偏差。在动物繁育、生殖毒理、精子生理学等科研场景，是高效可靠的手工精液分析工具。