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产品简介
Enzymatic Deglycosylation Kit 试剂盒该试剂盒包含去糖基化糖苷蛋白所需的酶和缓冲剂，去除所有N连接寡糖和许多O连接糖。酶被单独包装在20微升的小瓶中。这使得研究人员能够比我们用的KE-DGMX酶混合物更全面地表征附着在糖蛋白上的糖链
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | KE-DG01 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
Enzymatic Deglycosylation Kit 试剂盒 适当使用单个糖苷酶可确定水磷酸化（仅使用神经氨酸酶）以及特定存在N连接糖链（仅使用PNG酶F）和O连接糖链（使用神经氨酸酶、β-半乳糖苷酶、O-糖苷酶和β N-乙酰氨基氨基糖胺酶）。或者，QA-Bio在我们的DeGlycoMx试剂盒（KE-DGMX）中，将酶预混合溶液装在一瓶20微升中。
包含以下酶每种20微升：
PNG酶F（脑膜败泻金菊菌）)
O-糖苷酶（肺炎链球菌)
神经氨酸酶（尿素节关节杆菌)
β-半乳糖苷酶（肺炎链球菌)
β-N-乙酰氨基糖苷酶（肺炎链球菌)
其他提供的试剂：
反应缓冲液
变性解
特里顿X
牛菲图因（对照组）
特异性
酶促脱糖化套件将糖基化糖蛋白，去除所有N连接寡糖和许多O连接寡糖。N-链（天冬氨酸连接）通过PNGase F酶去除。此外，所有丝氨suan或苏氨suan连接（O-连接）Gal-（b1-3）-GalNAc-（a1）以及所有神经氨酸替代的Gal-（b1-3）-GalNAc-（a1）将通过神经氨酸酶和O-糖苷酶的组合去除。加入β-半乳糖苷酶和氨基糖胺酶将有助于更大O-连接结构的脱糖化。
试剂盒容量
方案推荐的酶量足以在规定时间内脱糖约100微克的平均糖蛋白。PNG酶F切割通常是速率限制反应，因为即使糖蛋白变性，也会缓慢去除一些被空间阻碍的N-连接残基。由于所有酶在反应条件下都能保持活性数天，若延长孵育时间，可能释放大量糖蛋白。相反，如果切割的糖蛋白量远少于100微克，则无需使用推荐的酶量。酶可以稀释到1X反应缓冲液7中。它们在稀释后会在4°C保持稳定。
牛Fetuin控制蛋白
牛Fetuin含有唾液化的N和O连接寡糖13。
注意：市售的Fetuin制剂含有蛋白酶，最终会分解蛋白质。Fetuin控制剂在90°C下热处理10分钟以使蛋白酶失活。Fetuin溶液可在4°C储存。
Bovine Fetuin Control Protein
1.在Eppendorf管中溶解100微克或更少的糖蛋白于30微升去离子水中。
2. 加入10 μL 5X反应缓冲液7和2.5 μL变性溶液。轻轻搅拌。
3. 以100°C加热5分钟。
注意：某些蛋白质在用SDS加热时可能会沉淀。在这种情况下，省略热处理，并将培养时间增加到添加酶后24小时。
4. 冷却至室温。加入2.5微升的Triton X-100溶液。轻轻搅拌。
注意：未添加Triton X-100可能导致某些酶活性降低。
5. 每种酶各加入1微升。
6. 在37°C下孵育3小时。
7.根据选择的方法进行分析。
Enzymatic Deglycosylation Kit 试剂盒
酶组分：‑20℃保存，含甘油，严禁反复冻融；建议分装使用；
缓冲液、对照蛋白：2‑8℃冷藏，禁止冷冻；整套试剂盒有效期 30 个月。
运输条件：干冰 + 冰袋冷链运输。
上海宝叶生物科技有限公司
国内试剂耗材经销代理
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提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。
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