Quick Easy BAC Modification Kit 试剂盒

Quick  Easy BAC Modification Kit 试剂盒

特色

• 快速且可靠的大型DNA分子克隆

• 选择位置上的精确DNA修饰

• 不受限制点影响

• 没有尺寸限制

应用

• 简单的血液酒精浓度修饰，如插入选择标记、删除带有选择标记基因的片段、插入功能片段并带选择标记基因

• 该试剂盒也可用于细菌染色体修饰

可选择标记基因的一步插入概述

1. BAC宿主与Red/ET的转化
第一步将Red/ET质粒pSC101-BAD-gbaA转移到含有BAC的大肠杆菌宿主中。

2. 红/ET
的BAC修饰 通过添加L-阿拉伯糖和温度从30°C到37°C的温度变化诱导介导红/ET的基因表达。 感应后，细胞准备电穿孔，添加同源臂的PCR产物被电穿孔。

3. 选择并提取经过修饰的BAC DNA
Select，以识别PCR产物中可选择标记传递的抗生素耐药性 携带成功改良的血液酒精。随后使用DNA微型制备以确认所需的BAC修饰。

Quick  Easy BAC Modification Kit 试剂盒

描述

该套装旨在通过革命性的红/气质重组技术改造BAC——这是一种强力工具，可在两周内将插入和删除等调整导入任何类型的BAC。 Red/ET重组通过体内重组和校对活动来减少构建体中的不良突变。套装中包含了改造BAC所需的所有材料，以及进行对照实验所需的材料，旨在让你熟悉这一新技术。 此外，还提供了将任意大肠杆菌株转换为适合用于Red/ET重组应用的合格菌株的载体。pSC101-BAD-gbaAtet配备四环素耐药盒。该盒包含一个温度敏感的复制起点（ori），只能在30°C时传播——到了37°C，质粒会丢失。这样当质粒不再需要时，可以简单地取出。 要引入突变（即本套装附带的霉素抗性盒式选择盒），首先必须向选择盒引入同源序列。这可以通过简单的PCR反应完成。 这些短同源序列（每个50 nt）可以自由选择以满足你的实验需求。只需选择要修饰的位置，并使用Red/ET重组技术将选择盒直接插入所需的核苷酸。随后，PCR产物需要通过诱导的红/气重组系统电穿孔到细菌中。 在成功进行红/外星重组后，可以通过传统的DNA微制备方法回收修饰DNA。

目录

• pSC101-BAD-gbaA（tet），是基于pSC101 ori（温度敏感的起源）基Red/ET表达质粒的衍生物

• 携带pSC101-BAD-gbaA（tet）的BAC宿主

• 阳对照实验，用于修饰150kb的BAC（宿主携带pSC101-BAD-gbaA的BAC克隆，BAC骨链中缺失的新型PCR产物，宿主体内的BAC-neo克隆作为阳性重组）

• 协议、质粒描述、寡核图谱和序列

上海宝叶生物科技有限公司

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