Collagenase, Type 1 酶

Collagenase, Type 1 酶

粗胶原酶制剂含有两种不同胶原酶的多种异构体，分别是磺胺基蛋白酶、氯三酯、胰蛋白梅样酶和氨肽酶。这种胶原蛋白溶解和蛋白水解活性的结合，有效分解细胞间基质，而细胞间基质是组织解离的关键部分。该复合物的一个组成部分是一种水解酶，它优先降解原生胶原蛋白中Y-Gly键的螺旋区，序列为Pro-Y-Gly-Pro，其中Y是最常为中性氨基酸的。这种切割产生了易被肽酶进一步消化的产品。粗胶原酶可被金属螯合剂如半光氨酸、EDTA或o-苯蒋碱抑制，但DFP则不受抑制。它还被α2-巨球蛋白抑制，这是一种大型血浆糖蛋白。Ca2+是酶活性所必需的。每种胶原酶的特定酶谱与研究细胞的来源组织（或细胞的用途）进行了相关，基于相关性，沃辛顿建立了几种粗胶原酶类型：1型、2型、3型和4型。

• 1型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、氯三烯酸和三胺活性的原始平衡。
• 2型蛋白酶活性较高，尤其是氯特利潘。
• 3型含有低水平的二级蛋白酶。
• 4型设计为特别低的三碱活性，以减少对膜蛋白和受体的损伤。
• 5型含有较高的胶原酶和酪蛋白酶值。
• 6型含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶比值为~2：1。设计为相对于I型（G槽）胶原酶，具有浓缩的II型（H口径）胶原酶。
• 7型胶原酶和酪蛋白酶活性是胶原酶1型和2型的四倍。

• 纯化胶原酶，代码：CLSPA，含有极低的二次蛋白水解活性，同时胶原酶活性较高。

Worthington还提供每种类型的0.22微米过滤制剂，预包装形式，用于直接重建及细胞分离和培养程序。酶类型与不同组织的有效性相关性良好，但并非优秀，部分原因是使用参数的差异。然而，大多数研究人员认为粗胶原蛋白酶批的组织分型是一项有益的服务。沃辛顿胶原酶及污染物检测的详细描述可见沃辛顿酶手册。此外，Worthington组织解离指南中还可查到组织特异性参考文献和详细的分离条件。

胶原酶测定法是Mandl的一种改良，胶原酶与天然胶原蛋白一起孵育五小时，利用Moore和Stein（JBC， 176， 367， （1948）的比色茚三酮法确定胶原蛋白分解程度。氨基酸释放时以每毫克胶原酶中亮氨suan微摩尔表示。

用途：粗胶原酶广泛用于酶促原级细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员使用粗糙的胶原酶制剂，如1型、2型、3和4型，或色谱纯化胶原酶（代码：CLSPA）;后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合使用。为了获得最佳效果，蛋白水解活性的精确组合必须根据解离组织进行调整。不同组织的类型与有效性相关性良好，但并非优秀，部分可能依赖于使用参数、目标以及批次间的差异。更多信息请参见胶原酶采样项目信息。沃辛顿还出版了《组织解离指南》，提供了关于这些应用中酶的更多信息，以及针对多种细胞和组织类型的具体参考文献。

Collagenase, Type 1 酶

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