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HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

产品简介

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂
HTRF β- 抑制蛋白 2 募集试剂盒是一款免疫检测试剂盒,用于检测并定量 β- 抑制蛋白 2 的募集情况,以此作为 G 蛋白偶联受体活性的检测指标。该试剂盒可用于表征配体对其受体中依赖抑制蛋白信号通路的偏向性。

更新时间:2026-07-13
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品牌revvity货号62BDBAR2PEB
供货周期一个月应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

产品概述

β-arrestin2 招募实验可检测 G 蛋白偶联受体(GPCR)激活引发的 β-arrestin2 与衔接蛋白 2(AP2)招募过程。β-arrestin2 检测试剂盒通过监测内源性 β-arrestin2 与其结合伴侣 AP-2 之间的相互作用,分析化合物对 β- 抑制蛋白信号通路产生的作用。现有文献表明,在 G 蛋白偶联受体相关的 β- 抑制蛋白信号通路研究中,针对该蛋白互作开展药理研究具备重要价值。
均相时间分辨荧光(HTRF)检测技术相较于其他检测手段具备多重优势:・均相即加即读检测体系・无需洗板操作・背景信号低・可简便地从 96 孔、384 孔微孔板体系缩小至高通量检测规格,如 384 孔低容量板、1536 孔板・检测信号稳定,可灵活调整读取时间或扩大检测样本规模


B-arrestin2 招募检测试剂盒检测原理

B-arrestin2 招募检测用于监测细胞内 G 蛋白偶联受体激活所介导的 β 抑制蛋白 2 招募过程。瑞威迪(Revvity)B-arrestin2 招募试剂盒具备超高灵敏度,可针对含有内源性 β 抑制蛋白 2 与衔接蛋白 2(AP2)的化合物开展药理学特征分析。该试剂盒包含两种标记抗体,一种偶联供体荧光基团,另一种偶联受体荧光基团;两种抗体均可特异性结合 β 抑制蛋白 2 与衔接蛋白 2。当细胞内发生 β 抑制蛋白 2 / 衔接蛋白 2 相互作用时,加入上述两种标记偶联物会使供体荧光基团与受体荧光基团紧密靠近,进而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。该信号强度与样本中 β 抑制蛋白 2 / 衔接蛋白 2 复合物的数量呈正相关。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

β-arrestin2 招募实验方案(方案一)

采用均相时间分辨荧光(HTRF)试剂检测 β-arrestin2 招募效应,整套细胞培养、刺激、稳定处理与检测操作可在同一块微孔板中完成。稳定处理步骤结束后需进行三次洗涤。本专用方案支持不经裂解的完整细胞及内源蛋白检测,室温过夜孵育后仍能保证优异稳定的均相时间分辨荧光检测信号质量。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

β-arrestin2 招募实验方案(方案二)

借助均相时间分辨荧光(HTRF)试剂检测 β-arrestin2 招募反应可在同一块培养板内完成细胞培养、刺激、稳定处理与信号检测全部流程。稳定处理步骤结束后需进行三次洗涤。本专用方案可直接使用未裂解细胞及内源性蛋白开展检测,即便室温过夜孵育后,仍能保证稳定可靠的均相时间分辨荧光检测效果。

β-arrestin2 招募实验方案的第二种操作方式,可在室温过夜孵育后吸除 80 微升检测试剂,以此提升信号背景比(S/B)。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

检测验证

以两种 G 蛋白偶联受体(GPCR)为模型,配备激动剂与拮抗剂表征配套图示将表达 Tag-lite SNAP-β2 肾上腺素受体、SNAP-V1A 加压素受体的人胚肾 293(HEK293)细胞以每孔 100000 个细胞的密度接种于 96 孔板,置于 37℃、5% 二氧化碳培养箱孵育 24 小时。随后在室温下进行给药处理:针对 V1A 加压素受体处理 5 分钟,针对 β2 肾上腺素受体处理 30 分钟;梯度浓度的加压素(作用于 V1A 受体)与异丙肾上腺素(作用于 β2 受体)均采用 4 号刺激缓冲液稀释。弃去孔内培养液,每孔加入 30 微升 1 号稳定缓冲液,室温稳定 15 分钟,再使用 100 微升 1 号洗涤缓冲液洗涤 3 次。最后加入 100 微升 β-arrestin2 招募检测试剂,室温避光孵育过夜后检测均相时间分辨荧光(HTRF)信号。
拮抗剂化合物采用相近实验方案完成表征:先梯度加入 SR 49059(V1A 受体拮抗剂)、ICI-118551(β2 受体拮抗剂),室温孵育 30 分钟,再分别加入终浓度 15 纳摩尔的加压素、40 纳摩尔的异丙肾上腺素激动剂。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂


HEK293 细胞中作用于 β2 肾上腺素能受体的药理化合物活性排名

将 Tag-lite SNAP-β2 受体稳转 HEK293 细胞以每孔 10 万个细胞的密度接种于 96 孔板,置于 37℃、5% 二氧化碳培养条件下孵育 24 小时。采用刺激缓冲液 4 梯度稀释一系列激动剂化合物,室温处理细胞 30 分钟后弃去培养液;加入 30 微升稳定缓冲液 1 室温孵育 15 分钟固定细胞,随后使用 100 微升洗涤缓冲液 1 洗涤细胞 3 次;最后加入 100 微升 β-arrestin2 招募检测试剂,室温避光过夜孵育后读取均相时间分辨荧光(HTRF)信号。
采用相近实验流程开展拮抗剂化合物活性评价:梯度加入不同浓度拮抗剂室温孵育 30 分钟,再添加 30 纳摩尔异丙肾上腺素,后续检测步骤与激动剂测试一致。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

检测方案 1 与方案 2 的检测效果对比

将 Tag-lite SNAP - 胰高血糖素样肽 1 受体人胚肾 293 细胞以每孔 100000 个细胞的密度铺于 96 孔板,置于 37℃、5% 二氧化碳环境下培养 24 小时。采用刺激缓冲液 4 梯度稀释艾塞那肽 4,室温下处理细胞 30 分钟后弃去培养液;加入 30 微升稳定缓冲液 1,室温稳定细胞 15 分钟,随后用 100 微升洗涤缓冲液 1 洗涤 3 次;最后加入 100 微升 β-arrestin2 募集检测试剂。室温避光孵育过夜后读取均相时间分辨荧光信号(检测方案 1)。
检测方案 2 在过夜孵育后增设一步操作:吸出 80 微升检测试剂,其余操作与检测方案 1 保持一致,使用同一台酶标仪、相同参数读取优化后的均相时间分辨荧光信号

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

简化通路

简化 G 蛋白偶联受体信号通路β- 抑制蛋白通过调控激动剂介导的 G 蛋白偶联受体(GPCR)信号传导,在 G 蛋白偶联受体信号通路中发挥核心作用。其功能涵盖介导受体脱敏与复敏全过程;作为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(如 MAPK1/3、AKT1 通路)的信号支架蛋白;参与招募泛素蛋白连接酶至受体。β- 抑制蛋白属于多价衔接蛋白,可将 G 蛋白偶联受体的信号传导模式切换:一种是 G 蛋白信号模式,负责从细胞膜传递瞬时信号;另一种是 β- 抑制蛋白信号模式,当受体内化并转运至胞内区室时启动,传导一套独特的信号。
在 G 蛋白偶联受体脱敏阶段,β- 抑制蛋白与经 G 蛋白偶联受体激酶(GRK)磷酸化修饰的受体结合,通过空间位阻阻断受体与 G 蛋白的偶联。
随后 β- 抑制蛋白可与衔接蛋白 2(AP2)复合物的 β- 衔接蛋白亚基相互作用,将多种受体靶向至网格蛋白包被小窝完成内化,使 G 蛋白偶联受体组装为多组分复合物。激动剂刺激后,β- 抑制蛋白与 AP2 的相互作用是 G 蛋白偶联受体定位于网格蛋白包被小窝的核心起始步骤,因此靶向该相互作用的药物化合物具备研究价值。
内化形成的抑制蛋白 - 受体复合物会转运至胞内体。
受体复敏过程需要移除结合在受体上的抑制蛋白,使受体发生去磷酸化并重新回到细胞膜。β- 抑制蛋白的参与程度会随受体种类、激动剂类型与细胞类型产生显著差异。

HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂


HTRF β-arrestin 2 Recruitment Kit 试剂

技术规格


应用
Second Messenger Detection
自动化兼容
Yes
品牌
HTRF
细胞或信号通路
MAPK / ERK signaling
检测方式
HTRF
产品组别
Kit
样本体积
200 µL
运输条件
Shipped in Dry Ice
靶点
β-Arrestin 2
靶点类别
GPCR
技术平台
TR-FRET
疗法领域
Cardiovascular
Infectious Diseases
Inflammation
Metabolism/Diabetes
NASH/Fibrosis
Neuroscience
Oncology & Inflammation
Rare Diseases
单位大小
20,000 assay points









































上海宝叶生物科技有限公司

 

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