PRECICE dCK Phosphorylation Assay 试剂盒

PRECICE dCK Phosphorylation Assay 试剂盒

该PRECICEdCK 磷酸化测定试剂盒®由NOVOCIB研发团队开发的，提供了一种现成的解决方案，用于评估新型核糖核苷和脱氧核糖苷类似物的磷酸化效果，使用试剂盒中提供的活性人重组脱氧胞苷激酶。每个试剂盒包含活性人重组脱氧胞苷激酶和校准的吉西他滨溶液，以确保在无酶学背景的情况下实现准确且可重复的磷酸化测量。

人类脱氧胞丁激酶（dCK）具有异常广泛的特异性，是许多抗癌和抗病毒核苷类似物——人类脱氧胞苷激酶（dCK）的激活酶。它磷酸化普林脱氧核苷（dAR，dGR）;嘧啶脱氧核苷（dCR）;核糖核苷（CR）以及核苷类似物的赛他拉滨;吉西他滨;氯来滨;氟达拉滨和L-核苷如 （3TC）。结构研究表明，dCK能够同时容纳D核苷和L核苷，解释了为何它能激活这两种手性药物。

测定原理

PRECICE dCK 磷酸化测定试剂盒®基于人类脱氧胞苷激酶（dCK）在核苷类似物存在下对脱氧氨苷（dIR）磷酸化的竞争性抑制。

• 在缺乏核苷类竞争者的情况下，dCK磷酸化脱氧氨苷，产生dIMP。

• dIMP被IMPDH立即氧化为dXMP，同时形成NADH₂。

• 在核苷竞争者存在下，去氧啰啶（dCK底物较差）的磷酸化被抑制，导致NADH₂的形成减少。

由于IMPDH活性供应过量，偶联反应瞬间进行，确保速率限制步骤为dCK活性。因此，dCK的酶活性——对应dIMP的形成速率——通过测量340纳米的NADH₂产生，直接计量监测（见图1）。

酶与检测验证

NOVOCIB的人类dCK酶是一种活性纯化的33 kDa蛋白，通过RT-PCR扩增从大肠杆菌中提取的人类肝癌细胞中提取的mRNA获得，并具有其底物特性（Km和Vmax）。其动力学参数与多种核苷类似物的已发表数据进行了比较（见下表）。

对NOVOCIB人脱氧胞苷激酶核苷类似物底物性质（Km和Vmax）的表征，与已发表的已发表的核苷类似物如花昔替啶、吉西他滨、克拉达滨和 （3TC）的动力学参数进行比较。

通过抗癌核苷类似物验证

通过吉西他滨、克拉达宾、芳昔定和天然核苷类药物验证

PRECICE dCK Phosphorylation Assay 试剂盒

上海宝叶生物科技有限公司

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