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产品简介
ABVector ProEasy A10S 试剂ProEasy 是经过 CsCl 超离纯化、精准线性化的 AcMNPV 杆状病毒基因组 DNA
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | ABV-A10S |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
ABVector ProEasy A10S 试剂
ProEasy™是一种改良的杆状病毒基因组DNA，在操作简便和蛋白质生产规模化时可靠且高水平的靶蛋白表达方面，极大地优于传统杆状病毒技术。由于操作简单，它也非常适合高通量应用。这一改进之所以能实现，是因为亲本ProEasy™杯状病毒含有一种基因敲除，在用于重组杆状病毒生成和传播的标准条件下无法复制病毒（见图1）。因此，任何背景可能性，即父母非重组杆状病毒污染的可能性都已被排除。ProEasy™无法在昆虫细胞中发起感染，除非其与编码感兴趣蛋白质的质粒载体DNA重组。市售的ProEasyDNA™也通过Bsu36.I限制性核酸酶线性化，以促进与转运载体的重组。在强多面体启动子的控制下，目标基因插入到杆状病毒DNA的多面体位点。这能实现杆状病毒系统中靶向蛋白质合成的最高速率。
| 图1。核心技术与ProEasy™技术的比较。 答：核心技术。亲本杆状病毒中的多面体位点由大肠杆菌b-半乳糖苷酶基因占据，该基因通过商业化的BacPAK6™和BaculoGold™载体通过Bsu36.I消化去除。少量由未消化DNA产生的亲本杆状病毒，在转染后可能污染杆状病毒后代，因为它能高效地传播。 B. ProEasy™ 技术。亲本杆状病毒的多面体位点被一个致死基因占据，该基因不允许亲本杆状病毒传播。因此，获得的重组杆状病毒株是100%重组的。 | ||||
推荐的质粒转移载体。AB Vector提供大量质粒转移载体，用于ProEasy™杆状病毒基因组载体DNA（见图2）。所有质粒转移载体都具有相同的“主链"，使大肠杆菌中复制质粒DNA成为可能，且仅在多面体启动子的下游部分有所不同。目标蛋白可以通过GST、His、GFP、MBP或双重His/MBP标签表达，也可以使用pVL1393质粒载体表达，也可以在无标签的情况下表达。我们还提供具有高效信号序列（pAB-bee™、pAB-bee-8xHis™、pAB-bee-FH™）的质粒转移载体，以促进分泌蛋白和膜蛋白的表达。C端标签是可选的，前提是目标基因ORF末端有终止密码子;举例说明pAB-bee™载体，显示两次目标基因克隆，带或无C端Heas标记。使用pAcAB3载体最多可表达3个靶蛋白（未显示）。任何与BacPAK6™和BaculoGold™载体兼容的质粒转移载体也兼容ProEasy™ DNA。
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| 图2。与ProEasy™兼容的质粒转移载体。目标基因可以克隆到任一这些质粒载体中，并通过“强制重组"转移到ProEasy™杆状病毒基因组DNA中。点击下方的病媒名称链接，获取有关病体的详细信息。 |
| ProEasy™相较于其他杆状病毒技术的优势。使用核心杆状病毒技术获得的重组杆状病毒库存中，总含有少量非重组杆状病毒。因此，建议通过终末稀释或斑块纯化纯化病毒库存，尤其是在目标蛋白具有细胞毒性或用于大规模蛋白质生产时。在这种情况下，少量亲本杆状病毒可能因选择优势而在病毒群体中扩散，而该病毒表达的目标蛋白可能传播效率较低。然而，菌斑纯化的BaculoGold™或BacPAK6™病毒库在多段过程中具有可靠性，且适合在实验室中持续使用。 Invitrogen基于巴克米德的技术，尤其是Bac-to-Bac™技术，常被青睐，因为它们在转染后几乎能生成100%的真正重组体。然而，由于存在转座子序列，Bac-Bac™重组体据报道可能不稳定，导致重组杆状病毒中目标基因缺失，病毒传播过程中重组蛋白表达减少甚至最终丧失（Pijlman G.P.等，《Verol杂志》，84： 2669-2678,2003）。当目标蛋白略有细胞毒性或最初过度表达时，这种效应尤为明显。由于存在转座子序列，重组杆状病毒本身不稳定，无法通过菌株纯化可靠修复此类菌株。 ABVector ProEasy A10S 试剂 ProEasy™技术没有这些缺点。它促进了100%纯度稳定的重组杆状病毒菌株的生成。使用ProEasy™技术获得的重组杆状病毒不含任何遗传元素，如转座子，这些元素会导致重组杆状病毒不稳定。此外，使用ProEasy™生成重组杆状病毒比使用其他载体更为简单，且操作简单。据我们所知，该产品在昆虫细胞中没有遗传致病性，也没有与其他杆状病毒载体不同的蛋白质表达特性。 |
上海宝叶生物科技有限公司
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