HTRF Human and Mouse Phospho-Histone H3 (Ser10) Detection Kit, 500 Assay Points

磷酸化组蛋白 H3（Serine 10 位点）检测原理

磷酸化组蛋白 H3（Serine 10）双板检测实验方案

本双板实验方案流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行细胞裂解；再将裂解液转移至 384 孔低容量检测板中，最后加入磷酸化组蛋白 H3（Serine 10）均相时间分辨荧光检测试剂。该实验方案可同步监测细胞活性与细胞汇合度。

磷酸化组蛋白 H3（Serine 10 位点）单块检测板实验方案

借助均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测磷酸化组蛋白 H3（Serine 10 位点），可直接在同一块培养、刺激及裂解细胞的微孔板中完成全程操作，无需洗板步骤。本高通量筛选专用实验方案可实现实验体系微型化，同时保证均相时间分辨荧光（HTRF）的检测效果稳定可靠。

HTRF Human and Mouse Phospho-Histone H3 (Ser10) Detection Kit, 500 Assay Points

检测验证

将处于对数生长期的海拉细胞培养至汇合度达 80%，再用诺考达唑处理 16 小时。去除培养液并完成细胞裂解后，通过离心收集可溶性上清液。取等量裂解液，并行对比蛋白质免疫印迹法（WB）与均相时间分辨荧光（HTRF）两种检测方法。均相时间分辨荧光检测法的灵敏度是蛋白质免疫印迹法的 25 倍。采用均相时间分辨荧光法检测磷酸化组蛋白 H3（第 10 位Serine）时，仅需 256 个细胞即可检测到有效信号，而蛋白质免疫印迹法则需要 6400 个细胞才能检出信号。均相时间分辨荧光检测法的灵敏度是蛋白质免疫印迹法的 25 倍。

将海拉细胞与 A431 细胞接种于 96 孔板中，使用诺考达唑处理 16 小时。诺考达唑是一种抗有丝分裂药物，可使微管解聚，将细胞阻滞在组蛋白 H3 第 10 位Serine磷酸化水平达到峰值的有丝分裂阶段。吸去细胞培养液后，分别加入 50 微升、100 微升或 200 微升裂解液，孵育 30 分钟。各取 16 微升细胞裂解液转移至 384sv 白色微孔板中，开展均相时间分辨荧光检测分析。将裂解液体积提升至 200 微升，可优化均相时间分辨荧光检测信号的线性度。

Phospho-Histone H3 (Ser10) as read-out for Aurora Kinase B inhibition

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