Douglas Instruments Oryx8 蛋白结晶机器人

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3. 降低音量范围

相同的机制用于分配最大8+8微升的滴剂，适用于 晶体采集和浸泡实验，以及100+100 NL的 筛查实验。多孔微型笔的每种成分的分配分辨率为5 nL。 建议总滴剂总量至少为200 nL，例如100 nL蛋白、95 nL结晶混合物和5 nL种子。 可以使用较小的滴剂，但不会流出 某些蛋白质的检测结果可靠。通过覆盖减少蒸发 带有滑动盾的板（见下文）。用于浸泡实验， 强烈建议进行微播种，详见下文。关于 用于优化实验的分配储液罐，详见下文。

5. 减少蛋白质或种子原料的浪费

接触式分配还有另一个优点：几乎没有蛋白质残留 实验结束时的尖部。此外，因为只有一个 （多通道）尖部被使用，实验中的所有蛋白质都可以 放置在单个PCR管内，同时减少了废物。当他们有 蛋白质足够多，大多数用户会准备300+300滴NL。对于96口井来说 板上只需29.4微升蛋白质，即仅浪费0.6微升。 如果你的移液器准确，就不需要放超过 指定数量放进管子里！

同样，如果每滴加10 nl种子，也只有大约1.5 整个96孔结晶板需要μL种子原料。 （在 种子存货。）

6. 简单优化实验

所有Oryx系统都可以通过三种不同方法进行简单的优化实验。

简单二维梯度

标准筛选软件允许用户为坐落、悬挂滴和*油下微批次实验（仅限Oryx4和8）定义简单的二维网格。 这些实验使用三到四种成分，用户指定向矩形网格的角落分配的低和最大浓度。 软件会线性插值这些条件。（用户界面不显示中间井的浓度，但报告文件中显示每口井的分配量。）

对于蒸气扩散实验，机器人先将成分分配到储液井，然后装载蛋白质和其他珍贵溶液（如种子饲料），最后同时将所有成分分配到滴阱。 注意：Oryx Nano机器人没有大容量的分配通道，因此只能向储槽井分配较小体积的原料溶液。 Oryx Nano机器人通常向例如5x4的油藏井等小型网格输送最多15微升的能量。Oryx4和Oryx8机器人通常向每个油藏井总量供应20至500微升的水。

（Oryx8提供了更复杂的优化方法，包括梯度实验、多元优化和用更多成分填充储液——详见下文。）

跨矩阵（加法）优化

这些系统的“组合优化"方法允许 每行添加不同的添加剂或种子原料。每种添加剂 从表格右侧对应的PCR管中取出 （下图中的A1、A2等）。通过将例如析出物排列在 柱（P1、P2等）、不同的沉淀剂组合和 添加剂可以非常快速地进行测试。这对于重新洗牌非常有用 多种成分的成分，因此这些成分并不有益 可以迅速消除，并识别趋势。例如， 某些成分可能促进与某些成分形成晶体 形态。

组合方法也可用于系统性地识别单次实验中种子株的适当稀释。我们建议使用高浓度种子高浓度 但对于常规的rMMS筛查，这可能导致小晶体雨。通常可以通过稀释种子株来优化这些条件，达到大约5个 每滴晶体（如上图所示的热解质实验）。例如，不同浓度的种子存量 可以放置在上方1-1E-6稀释的PCR加载管中。四种不同的病症 可以放置在上方标记为P1至P4的四列中。

这是获得非常稳定晶体供应的非常有效方法 用于数据收集和浸泡实验。

加法散射优化

均匀分布在蒸气扩散板上，最多可达5种添加剂（如种子存量）。蒸气扩散板通常会预先准备好 沉淀剂与盐或沉淀剂相对于pH值呈二维梯度。机器人随后会在 在二维梯度上形成图案。这会测试不同浓度下的添加剂。

该实验通常用于测试最多5种稀释种子原料。它也可以用于检测其他添加剂或蛋白质浓度。

仅Oryx4和Oryx8系统的特点：

7. 悬挂滴落实验

Oryx4和Oryx8可以设置22毫米、18毫米和12毫米的盖板滑套实验，以及15孔 EasyXtal 的盘子，每个最多可滴5滴 封面幻灯片。体积范围从100+100 nl到8+8 μl（假设24滴）。你也可以添加一种添加剂 用Oryx4对每个滴落，Oryx8最多可添加五种添加剂。这对潜在客户非常有用 在随机微播种实验中发现，可能需要添加例如稀释的种子原料以获得晶体。

例如，在下方所示的实验中，一滴含有种子原料、蛋白质和储液;第二滴没有种子，但 多一点蛋白质，而第三滴没有种子，但多了一点储液。

你必须手动把盖滑套转移到储水槽托盘上。几滴后可以暂停实验，以便进行传输。 Oryx8 可以为优化实验（包括二维网格和多变量实验）设置储存槽（见下文）。经过 OryxNano不具备投放功能。

8. 加性筛查

加法实验是一种广为人知且有效的方法 优化。只需添加一组潜在配体或其他配体 筛选到命中状态，晶体通常可以优化。自从他们 配备更大型的平板装载机，Oryx4和Oryx8系统可容纳 靶材右侧还有一块额外的96孔板，内含添加剂 盘子。该尖部可从加剂板上收集例如100个nl样品，且 将这些液体与蛋白质及储液一同滴入滴剂中。 初步筛选时，添加剂量相对较大，通常 例如，300 nl（蛋白质）+ 100 nl（储液）+ 200 nl （加法）。例如，这些体积可以用来表示初始 *弹屏幕由汉普顿研究公司制作。最终考试 优化，通常使用较小体积的添加剂，例如。 300 nl（蛋白质）+ 200 nl（储液）+ 100 nl（添加剂）。

9. 油下微批

微批次是一种非常简单的结晶方法。小样本 蛋白质（100 nl至5.0 μl）与存制溶液小量混合 滴落，并涂上油以防止蒸发。为了筛选 实验中，使用石蜡油和硅胶各占一半的比例会有帮助 油。硅胶允许缓慢蒸发，大约一个月内 在蛋白质的相图中产生扫描效果。对于 优化，可以使用纯石蜡油，从而减少蒸发 但至少是这样。研究表明，微批量检测能发现的数量相当于 比蒸气扩散的浓度稍微高一点，但主要优势是 （原因可能不甚清楚）某些蛋白质 微批次结晶效果远佳于其他方法。微批次罐 帮助保护敏感蛋白，如膜蛋白， 厌氧产生的蛋白质，因为它能减少氧化和 使滴状物表面的表皮更薄。

完整的微批实验脚本集，包括筛选，均可获得。 加法筛选、二维梯度和MMS微播种。油会自动滴入水滴，立即覆盖其上。

利用结合MB-VD实验，可以同时分配两种筛选方法。也可以分配不同的滴剂比例，或在任何实验或滴剂中添加种子原料或添加剂。

10. 升级

Oryx4 - Oryx8升级

Oryx4 系统可以轻松升级到 Oryx8，只需添加一个 第二是底盘，并且更换了连接器的颜色。然而， OryxNano 不容易升级，因为它的护甲板较小 装载手。如需更多详情，请联系公司。

脂质立方相（LCP）选项

脂质立方相（LCP）分配是一种选择 Oryx4和Oryx8（Oryx Nano不提供）。新系统可选择此选项 并且可以安装到最近的兼容系统上。臂上安装的正排量 注射器驱动可喷出最小至10 μl及更大容量的LCP。 该系统可以分配到LCP夹层板，如Laminex、Marienfeld和IMISX 96井板。该系统还可以将LCP分配到所有其他兼容的车牌，包括坐落式车板。

软件中可以选择体积形状（分配技术）。这使得 可以选择更高的锥形体积或更宽的煎饼形体积（见下图）。LCP之后 体积被分配，沉淀剂和添加剂立即被投放 覆盖LCP体积，防止LCP蒸发或相变。

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