HTRF Anti-GST mAb Eu-Conjugate 抗体

产品概述

HTRF Anti-GST mAb Eu-Conjugate 抗体 工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光（HTRF）相互作用检测实验中，一个作用分子（直接或间接）标记供体，另一个分子（同样直接或间接）标记受体。信号强度与两个分子的结合程度成正比。本示例中：抗GSH / GSSG S - 转移酶单克隆抗体 - 铕穴状化合物（MAb Anti GST-Eu cryptate）与带有GSH / GSSG S - 转移酶标签的分子 A 结合，而分子 B * 则结合标记了 HTRF 受体的特异性抗体。* 分子 B 也可进行Biotin化、加标签或 Fc 融合修饰。在这类情况下，可使用标记有受体的对应 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测

检测方案

右侧示例介绍了该实验方案，实验最终检测体系体积为 20 微升，用于检测 GST 标签蛋白 A 与无标签蛋白 B * 之间的相互作用。分别加入两种蛋白组分（各 10 微升），孵育，再加入 Eu 穴状化合物标记的抗 GST 单克隆抗体（5 微升）以及受体染料标记的抗蛋白 B 抗体（5 微升），孵育后进行读数检测。* 蛋白 B 也可进行Biotin标记、加标签、Fc 融合或直接标记。在这些情况下，可使用对应的受体染料标记 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测

检测详情

检测数量与活性部分有何关联？

每孔的平均结合物量反映总体生物材料含量。相较于总结合物的量，通常优先采用活性部分的量。对于穴状化合物和 d2 标记结合物，标记物的分子量可忽略不计，因此总结合物量等同于活性部分的量。XL665 标记物则不同，其总结合物量会随 XL665 结合物最终摩尔比发生变化；而 Revvity 提供的活性部分量是固定的，该数值基于订购的检测份数确定

推荐用量：穴状化合物与 XL665 偶联物

穴状化合物偶联物的用量不可过高，避免造成检测仪器饱和以及背景信号超出可接受范围。多数情况下，穴状化合物浓度 1 至 5 纳摩尔每升较为合适，在适配 HTRF 技术的检测仪上，620 纳米波长处可产生 20000 至 80000 计数每秒的信号，具体数值随仪器型号变化。XL665 偶联物的用量应尽量与实验体系中的对应组分匹配，从而让尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记。因此，若待检测标记分子的实验浓度为 20 纳摩尔每升，抗标签 - XL665 的浓度应与之等摩尔或更高

检测验证

p53/HDM2 结合实验

p53 是一种抑癌蛋白，可在 DNA 损伤应答过程中被激活；HDM2 可与 p53 结合，介导 p53 发生泛素化降解，从而调控 p53。我们开发的均相时间分辨荧光（HTRF）实验用于检测 p53 与 HDM2 之间的结合，评估 p53 蛋白 N 端丝氨suan

磷酸化对 HDM2 结合作用的影响，并测定 p53 同源蛋白 p73 与 HDM2 的相对亲和力。本实验使用位点特异性Biotin标记的 p53 蛋白、GST 融合 HDM2 蛋白、链霉亲和素 - XL665 以及铕穴状化合物标记的抗 GST 抗体

上海宝叶生物科技有限公司

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