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产品简介
FAOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent)FAOBlue 直接检测活细胞中的脂肪酸氧化（FAO）活性。 FAO Blue是一种新设计的荧光探测系统（激发405nm：发射460nm），用于研究能量产生的分解代谢途径。通过将染料添加到细胞中，可以检测线粒体及其相关酶，从而测量FAO 活性。
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | FNK-FDV-0033 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
FAOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent)
产品背景
FAOBlue是直接测量活细胞中FAO活性的试剂。FAOBlue是一种Coumarin染料，含有被乙氧甲酯保护的壬酸（C9），在FAO代谢前，激发405 nm无荧光。FAOBlue可通过直接穿透细胞膜进入细胞，其乙氧甲基酯被细胞内酯酶水解。游离FA型FAOBlue被转化为Acyl-CoA，并进一步纳入FAO通路。Acyl-CoA型FAOBlue经过三次FAO循环降解为含有丙酸（C3）的非荧光Coumarin。经过第四次FAO降解后，Coumarin染料从丙酸中释放并扩散到整个细胞中。FAOBlue在FAO代谢前不表现出405 nm激发的荧光，但FAO循环释放的Coumarin在405 nm激发时表现出强烈的蓝色荧光。基于FAOBlue的FAO测定法使得通过简便的程序测量FAO活动成为可能。etomoxir抑制肉碱穿梭极大地降低了活细胞中的荧光增强。这些数据表明FAOBlue主要检测线粒体FAO活性。
FAOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent)
应用
重建与储存
如何使用
参考数据与实验指南
| FAOBlue |
FAOBlue（蓝线）吸收光谱（左）和FAO衍生染料（红线）在PBS缓冲液（pH 7.4）中代谢后释放的Coumarin衍生染料。 吸收光谱：FAO明显偏移了Coumarin衍生染料的吸收峰，该峰值与FAOBlue的峰值相去。 荧光光谱：Coumarin衍生染料表现出强烈的蓝色荧光，但FAOBlue在两种化合物都以405纳米处出现时，荧光较少。 注：FAOBlue在激发300-380纳米（最大350纳米）时，会显示蓝色荧光（灰线;370-450纳米）。 |
| 成像实验指南 |
共焦激光显微镜：请使用显微镜中配备的405纳米激光。使用405纳米激光只能检测来自香豆su衍生染料的荧光信号。 透射荧光显微镜：激发滤光片非常重要。商业DAPI滤光器与该试剂不兼容，因为DAPI滤波器会激发FAOBlue和香豆su衍生染料。建议使用能通过390-450纳米波长光的激发滤光片。 |
应用数据
| 4种癌细胞系中FAO活性的可视化 | |
四个癌细胞系（HepG2、LNCaP、HeLa和A549）在HBS缓冲液中用FAOBlue处理，或未预处理强效FAO抑制剂etomoxir（40微米，3小时）。FAOBlue培养后，观察到蓝色荧光（例如405 nm/电磁430-480 nm）。所有细胞系在细胞质中均显示蓝色荧光，但etomoxir预处理明显降低了荧光强度。这些结果表明蓝色荧光源自细胞中的FAO活性。 * 实验条件： HepG2,5微米FAOBlue30分钟。 LNCaP，20微米FAOBlue持续120分钟， HeLa，20分钟？M FAOBlue，120分钟， A549,5？M FAOBlue 30分钟 |
| 药物干扰FAO活性 | |
HepG2细胞与200微米FAO激活剂AICAR通过AMPK激活，预孵育3小时，或200微米部分FAO抑制剂拉诺拉嗪孵育12小时。药物处理后，细胞被用5微FAOBlue培养30分钟。与对照细胞相比，AICAR预处理显著提高了蓝色荧光强度。另一方面，部分FAO抑制剂拉诺拉嗪的预处理明显降低了蓝色荧光强度。例如405 nm/电磁。430-480 nm |
| 药物对FAO活性影响的定量分析 | |
ND630是一种乙Acyl-CoA羧化酶的抑制剂，被视为非酒精性脂肪肝（NAFLD）的潜在治疗药物。HepG2细胞与不同浓度的ND630进行过期孵育4小时。ND630处理后，细胞用5微量FAOBlue处理30分钟。定量了每种ND630浓度的蓝色荧光强度。例如405 nm/电磁。430-480 nm |
| 使用NASH模型小鼠分析FAO活动 | |
非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种典型疾病，表现出脂肪酸代谢活动较低。对照健康小鼠和NASH模型小鼠口服400 mg/kg的贝扎非布拉，这是一种NASH的治疗药物。给药4周后，从对照组小鼠和NASH模型小鼠中分离原级肝细胞，并在培养皿中培养。原发肝细胞进一步用5微米FAOBlue治疗30分钟，并进行了荧光成像。与对照细胞相比，NASH模型小鼠来源肝细胞显示FAO活性较低。贝扎非布酸显著恢复了从NASH模型小鼠分离出的肝细胞的FAO活性。FAOBlue是一个优秀的工具，用于估算药物对FAO活性的效果和效率。 *小鼠实验的详细程序详见文献1。例如405 nm/电磁。430-480 nm |
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