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cisbio 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 细胞试剂盒

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磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 检测能够检测组蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化,组蛋白 H3 是基因表达和有丝分裂的关键调节因子。Ser10 的磷酸化与有丝分裂和减数分裂期间的染色体浓缩密切相关。cisbio 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 细胞试剂盒

更新时间:2024-03-19
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cisbio 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 细胞试剂盒

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概述:磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 检测能够检测组蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化,组蛋白 H3 是基因表达和有丝分裂的关键调节因子。Ser10 的磷酸化与有丝分裂和减数分裂期间的染色体浓缩密切相关。


磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测原理image.png

磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 检测可测量在 Ser10 位点磷酸化的组蛋白 H3。与 Western Blot 不同,该检测基于平板,不需要凝胶、电泳或转移。磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测使用 2 种标记抗体:一种带有供体荧光团,另一种带有受体。选择第一种抗体是因为它能特异性结合蛋白质上的磷酸化基序,第二种是因为它能够独立于蛋白质的磷酸化状态识别蛋白质。蛋白质磷酸化能够形成涉及标记抗体的免疫复合物,并使供体荧光团靠近受体,从而产生 FRET 信号。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 2 板检测方案

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2 板协议涉及在裂解前在 96 孔板中培养细胞,然后将裂解物转移到 384 孔低体积检测板,然后添加磷酸组蛋白 H3 (Ser10) HTRF 检测试剂。该协议使细胞的生存能力和汇合度得到监测。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 1 板测定方案

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使用 HTRF 试剂检测磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 可以在用于培养、刺激和裂解的单个板中进行。无需洗涤步骤。这种 HTS 设计的协议可实现小型化,同时保持稳健的 HTRF 质量。

HTRF 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测与蛋白质印迹法的比较

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将指数生长的 Hela 细胞培养至 80% 汇合度,并用诺考达唑处理 16 小时。培养基去除和裂解后,通过离心收集可溶性上清液。等量的裂解物用于 WB 和 HTRF 的并排比较。HTRF 检测的灵敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸组蛋白 H3 (Ser10),仅 256 个细胞就足以进行很小信号检测,而 Western Blot 信号则需要 6,400 个细胞。HTRF 检测的灵敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 作为细胞增殖的有丝分裂生物标志物

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将 Hela 和 A431 细胞接种在 96 孔板中,并用 Nocodazole 处理 16 小时,Nocodazole 是一种抗有丝分裂剂,可解聚微管并在组蛋白 H3 Ser10 磷酸化达到很大时阻断细胞有丝分裂。去除细胞培养基后,加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解缓冲液孵育 30 分钟。将 16 µl 的每种裂解物转移到 384sv 白板上进行 HTRF 分析。将裂解体积增加至 200µl 可改善 HTRF 检测信号的线性度。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 作为极光激酶 B 抑制的读数

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细胞周期中的磷酸组蛋白 H3-Ser10

总体组蛋白磷酸化在细胞周期期间波动非常显着,其特征在于有丝分裂中丝氨酸 10 上组蛋白 H3 磷酸化的峰值。极光激酶 B 直接负责有丝分裂组蛋白 H3 Ser10 磷酸化。与 BORA 复合的 Aurora 激酶 A 负责在 G2 期初始激活 PLK1,导致在 G2/M 转换检查点激活细胞周期蛋白依赖性激酶 1 有丝分裂进入。极光激酶 A 在人类癌症中经常被扩增,极光激酶 A 在人类肿瘤中的过度表达与不良预后和基因组不稳定相关。此外,极光激酶 B 的高表达水平与胶质母细胞瘤、卵巢癌和肝细胞癌的不良预后相关。

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