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产品简介
AB Vector ProGreen 试剂高水平的靶蛋白 表达用于监测病毒的GFP标记 传播
| 品牌 | AB Vector | 货号 | A1 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
AB Vector ProGreen 试剂
ProGreen™杆状病毒基因载体DNA编码Aequorea victoria绿色荧光蛋白(GFP)(见图1)。GFP支持重组病毒的繁殖监测、培养条件优化以及通过“终端绿色稀释"滴定病毒库存。多面体位点保留用于在强多面体启动子控制下插入目标基因。最初,多面体位点由大肠杆菌β半乳糖苷酶基因占据。为了插入目标基因,利用Bsu36.I从梭状病毒DNA中移除了β-半乳糖苷酶基因,该酶在多面体启动子下游的β-半乳糖苷酶基因和下游本质基因ORF 1629中被切割。

| 图1。ProGreen™ DNA的示意图。基因GFP用绿色箭头表示。多面体启动子用黑色三角形表示。大肠杆菌β半乳糖苷酶基因最初存在于多面体位点。然而,在商业化的ProGreen™载体中,它会与关键基因的一部分一起去除,以便将β半乳糖苷酶基因替换为目标基因 ProGreen™可以推动目标蛋白合成速率,使其接近重组杆状病毒系统中具体目标蛋白可达到的最大值,同时高水平表达GFP(见图2)。大肠杆菌β半乳糖苷酶(β加仑)作为靶蛋白在多面体位点表达,以便充分比较ProGreen™与传统载体BacPAK6™之间目标蛋白合成速率。如图2所示,目标蛋白(β加仑)在两种载体中表达的水平大致相同,而ProGreen™也表达GFP。 |

图2。感染BacPAK6™和基于ProGreen™的重组杆状病毒的蛋白质表达谱,这些细胞在多面体位点表达大肠杆菌β-半乳糖苷酶(β加仑),受多面体启动子控制。 冷翅虫Sf9细胞在多重作用下感染重组杆状病毒,每细胞形成5个斑块,并在感染后60小时采集。细胞在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA、0.5% NP-40 中被裂解,裂解液在30,000克离心15分钟。β-半乳糖苷酶和GFP高度可溶,几乎存在于上清液中。上清液蛋白被分离到11%的SDS-PAGE中,并用Coomassie blue染色。 AB Vector ProGreen 试剂 上海宝叶生物科技有限公司
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