LipoD293 In Vitro DNA Transfection Reagent

SignaGen Laboratories 是一家总部位于美国的生物技术公司，专注于高质量基因递送技术的开发与生产。自成立以来，SignaGen已发展成为一家可靠的制造商，向全球学术界、生物技术、制药和政府机构供应研究级试剂和病毒载体。

所有SignaGen产品均在美国开发和制造，病毒载体生产——AAV、腺病毒和慢病毒——均在美国完成。我们的设施包括超过33,000平方英尺的研发实验室和超过6,000平方英尺的洁净室，实现对开发、制造和质量保证的全面内部控制。

SignaGen提供三大类DNA和siRNA转染试剂，旨在高效、可重复且低毒性地实现体外和体内应用的基因递送。

LipoD293 In Vitro DNA Transfection Reagent

描述：
利用我们创新且专有的脂质结合技术，LipoD293™（版本II）专门设计和配制了专有增强剂，用于HEK293细胞及其他哺乳动物细胞类型的高效DNA转染（见图1）。作为第二代基于脂质体的DNA转染试剂，LipoD293™（版本II）在HEK293衍生细胞及许多其他哺乳动物细胞中表现出的转染效率，同时保持低细胞毒性。

与之前的配方相比，LipoD293™（版本II）采用了更精细的化学原理，导致基因递送效率提升了3–4倍。一瓶1.0 mL的LipoD293™（版本II）试剂，足以在24孔板上完成约666次转染，或在6孔板中完成333次转染。

特点：
– 难以转染细胞
的选择 – 实现异常高的病毒滴度
– 对极大DNA构造体（最高可达180 kb）的转染非常有效
– 在悬浮HEK293细胞（如293F、293H）中表现同样优异
– 支持高水平重组蛋白表达
– 在293个细胞
中血清和抗生素存在下，转染效率提升– 单DNA转染和多DNA共转染的性能
– 高性价比的转染解决方案

储存条件：
保存温度为4°C。 在推荐条件下储存时，产品可稳定保存12个月或更长时间。

LipoD293 In Vitro DNA Transfection Reagent

LipoD293™ DNA 体外转染试剂（版本二）与品牌产品转染效率的比较

比较LipoD293™试剂（Ver. II）与lipofectamine 2000（L2K）和Fugene HD在HepG2细胞上的转染效率。
右侧面板：LipoD293（版本II）与Lipofectamine 2000（L2K）和富金HD在肝炎细胞上的转染效率比较。根据制造商的方案，GFP DNA（pEGFP-N3）通过不同的转染试剂转染到HepG2细胞（在胶原蛋白预处理的盘子上培养）。通过转染
后48小时通过FACS检测到GFP阳性细胞（%）和荧光强度。左面板：血清和抗生素的存在提升了LipoD293（版本II）对HepG2细胞的效率。HepG2细胞（在胶原处理皿上培养）被转染三种不同条件——-无血清和抗生素，含有10%血清和抗生素，转染后5小时取出;转染后5小时无取出时含有10%血清和抗生素。

比较LipoD293™试剂（Ver. II）与lipofectamine 2000（L2K）、TransIT和Fugene 6在CHO细胞上的转染效率。
右侧面板：LipoD293（版本II）与Lipofecatmine 2000（L2K）、TransIT和Fugene 6在CHO细胞上的转染效率比较。编码Renilla荧光素酶（phRL-CMV）和GFP（pEGFP-N3）的DNA，按照制造商的方案转染了不同的DNA转染试剂。转染后24小时，分别用Renilla测定系统和尼康Eclipse荧光显微镜检测到Renilla荧光酶活性和GFP荧光。
左侧面板：LipoD293价格（$/1.0 ml瓶）与Lipofecatmine 2000（L2K）、TransIT和Fugene 6的价格比较

比较LipoD293™试剂与Lipofectamine 2000（L2K）在难以转染的原级大鼠主动脉平滑肌细胞上的转染效率。大鼠主动脉平滑肌细胞分别通过LipoD293™试剂（左侧面板）和Lipofectamine 2000（L2K，右侧面板）制备并转染pEGFP-N3，符合制造商的方案。转染效率通过在转染后24小时用尼康Eclipse 2000显微镜检测GFP荧光来评估。以上图片由芝加哥大学肺部与重症监护科的Nickolai Dulin医生慷慨提供。

比较LipoD293™试剂与Fugene HD在难以转染细胞（LNCap细胞）上的转染效率。LNCap细胞按照ATCC推荐的程序培养，并分别与pBabe-hygro-SSeCK（1.5微克）和pEGFP-N3（0.5微克）在每孔（6孔板）、LipoD293™试剂（左面板）和Fugene HD（右面板）共转染，按照制造商的方案。转染效率通过在转染后24小时用尼康Eclipse 2000显微镜检测GFP荧光来评估。

两个例子展示了LipoD293™试剂对HepG2和SaoS-2等难以转染细胞的效率。在血清/抗生素存在下，HepG2和SaoS-2细胞95%的合流率分别转染pEGFP-N3和pSV-β半乳糖苷酶DNA。转染后48小时分别用蔡司510共焦点显微镜和β半乳糖苷酶染色套件检测效率。

比较LipoD293™试剂与293果蛋白在HEK293细胞上的转染效率。HEK293细胞使用LipoD293™体外DNA转染试剂（Ver. II）（上面板）和受欢迎的品牌产品Invitrogen的293fectin™（下面板）转染pEGFP-C1质粒。细胞在转染后24小时通过尼康Eclipse荧光显微镜进行DIC相位成像（左侧面板）和FITC成像（右侧面板）进行可视化。

LipoD293™试剂与293fectin、Xfect和Fugene 6转染试剂在293F悬浮细胞下蛋白质生成方面的比较。30 mL 293F细胞在标准培养基中培养，采用LipoD293™体外DNA转染试剂（Ver. II）（20微克质粒DNA）、293Fectin（30微克质粒DNA）、Xfect（30微克质粒DNA）和Fugene 6（30微克质粒DNA），按照制造商标准转染协议转染pEGFP-6xHis质粒。转染后48小时（左侧面板）观察到GFP荧光，A为LipoD293，B为293果蛋白，C为Xfect，D为Fugene 6。随后通过Ni-NTA亲和柱纯化了6xHis标记的GFP蛋白。在SDS-PAGE上分离了5微升第一洗脱分数，随后对Coomassie Brilliant Blue染色（右上面板E），分别在第1通道为LipoD293、第2通道为蛋白质标记物、第3通道为Xfect、第4通道为293fectin，第5通道为Fugene 6。蛋白质产率通过光谱仪（右下面板F）定量。

LipoD293™（Ver. II）与脂菲卡胺LTX（LTX）对慢病毒（LV）生成的比较。三条cDNA与LipoD293™（Ver. II）和脂氧胺LTX（LTX）共转染到293FT细胞中。使用GFP载体pHR-SIN-cppt-CMVEWP测定LV滴度。每孔1×105个293F细胞被镀入24孔板中，随后加入不同量的载体上清液，分别为1微升（上板）和10微升（下板）。5天后，细胞通过FACS排出。右上角的数字表示转导细胞的百分比。用LipoD293™和L2K生成的左左心室滴度分别为8×10^6和3×10^6 tu/ml。

上海宝叶生物科技有限公司

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