PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit

PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit

PURExpress® 体系是一种基于 PUREsystem™（Shimizu et al.，2001）的重组蛋白合成体系，其中所有体外转录和翻译所需的组份都纯化自大肠杆菌。

•    系统中所有蛋白都含有 His 标签，用于转录/翻译偶联；核糖体不含 His 标签
•    T7 RNA 聚合酶促成体外转录
•    核酸酶和蛋白酶活性，以保证合成蛋白和编码靶标的稳定性
•    模板可以是质粒 DNA、线性 DNA 或 mRNA
•    目标蛋白可以在几个小时内合成并可见
•    合成多种靶标肽和蛋白
•    合成的蛋白可进行共翻译放射性标记或荧光标记
•    蛋白可进行反向纯化，或直接进行功能性分析
•    应用包括高通量筛选/定向进化、合成生物学、毒性蛋白或难表达蛋白合成、蛋白折叠研究、活性研究和蛋白间相互作用
•    基于重组特性，NEB 可以提供多个移除翻译因子或大分子的试剂盒，以便进行特定研究（见配套产品）
•    与 PURExpress 二硫键增强剂（NEB #E6820）兼容

PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit

使用 PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒的表达蛋白

在 25 μl 反应体系中加入 250 ng 模板 DNA 和 20 单位 RNase 抑制剂，37℃ 温育 2 小时。各取 2.5 μl 反应液使用 10 – 20% Tris凝胶进行 SDS-PAGE 电泳分析。红点处指示为目的蛋白。Marker M 是蛋白质分子量标准（NEB #P7703 已停产，被 NEB #P7717 替代）。

图 2：添加 35S-甲硫氨suan通过放射自显影显示蛋白

在 25 μl 反应中加入 250 ng 模板 DNA、20 单位 RNase 抑制剂以及 2 μl 35S-甲硫氨suan，37℃ 温育 2 小时。各取 2.5 μl 反应液进行 SDS-PAGE 电泳分析，将凝胶固定 10 分钟，80℃干燥 2 小时，并在 -80℃ 条件下使用 射线胶片曝光 5 小时。

图 3：使用 PURExpress 体系进行蛋白合成和纯化示意图

图 4：使用 PURExpress 体系表达和反向纯化 DHFR 和 T4 DNA 连接酶

根据随附产品说明书中的建议，使用 125 μl 的反应体系。样本使用经考马斯亮蓝染色的 10 – 20% Tris凝胶进行分析。在这两种情况下，目的蛋白都可以在总蛋白质的条带中可见。红点处指示为目的蛋白。

上海宝叶生物科技有限公司

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