产品中心
Product Center
产品简介
Genovis：LysCERATOR Lyophilized LysCERAT（Lys-C）是一种赖氨酸特异性内肽酶，能够分解赖氨酸残基的C端蛋白质，包括赖氨酸-Proline连接处。
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | B0-LC1-020 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
Genovis为生物制药和科研行业的客户提供工具，促进并节省新治疗方法和诊断技术开发的时间。Genovis 酶产品，SmartEnzymes™是一系列独特的快速且易用的酶促工具，旨在提升复杂生物制药分析或制备工作流程中的疗效和通量。这些酶被全球科学家广泛使用，创新的产品形式促进了生物药物的表征、开发、生产和质量控制。
Genovis研发活动的基石之一是客户关系，使产品开发能够满足客户需求。同样宝贵的是与专注于新酶表征、开发新工作流及新靶点抗体的学术团队合作。
Genovis：LysCERATOR Lyophilized
在100 mM Tris pH 8.0（含4M尿素）中，37°C培养2小时时，0.01微克LysCERator液溶酶≥90%的1微克人IgG1。
LysCERATOR在Tris和HEPES缓冲液中，pH值为7.0至9.0，活性最佳。在变性条件下，活性可保持至8 M尿素和2 M 盐酸胍。
LysCERATOR冻干的液态以50 mM HEPES、100 mM NaCl、2%海藻糖、pH 8.5、未添加防腐剂的液质干燥状态供应。它以冷藏方式运输，抵达时应保持在-20°C下保存。重建后，LysCERATOR液溶脂后在-20°C下稳定4周，+4-8°C下稳定1周。
Genovis：LysCERATOR Lyophilized
应用
增强了具有挑战性的K–P位点的切割，减少了遗漏的切割，并实现了更完整、更自信的肽鉴定。
赖氨酸残基处的切割后再切割Proline（K–P位点）是Lys-C消化中一个的挑战，常因Proline诱导的构象约束而导致缺失切割。为评估LysCERAT克服这一局限的效果，对其在K–P位点的表现进行了详细评估，并与两种市面上可用的Lys-C酶——一种非重组酶和一种重组酶——进行了比较。
使用Trastuzumab评估了消化效率。图示了来自轻链N端的两种肽的相对强度：LC aa 1–39，代表预期切割，LC aa 1–42，包含K39/P40位点缺失的切割。经过2小时的LysCERATOR消化后，切割的肽（LC aa 1–39）成为较多的类型，而用非重组替代的Lys-C消化主要产生错切肽（LC aa 1–42）。
经过LysCERATOR隔夜消化后，K-P位点几乎消化，而与非重组替代Lys-C消化后，仍保留大量误切肽。与重组替代Lys-C消化后，两种肽的整体信号强度较低，显著的是含有两个缺失切割的肽（LC aa 1–45 – 未显示）。
综合来看，这些结果表明，LysCERAT在具有挑战性的K–P位点的消化效率优于其他Lys-C酶，导致漏切更少，蛋白水解过程更完整。
K-P位点Lys-C消化效率比较两种Trastuzumab轻链肽的强度：1）aa 1-39，代表预期的切割产物;2）aa 1-42，含有K39/P40位点未切割的aa 1-42，a）LysCERATOR，b）非重组替代Lys-C或c）重组替代Lys-C。Trastuzumab在消化前，在2 M尿素中进行变性、还原和烷基化，酶与底物比为1：50，置于0.1 M Tris缓冲液（pH 8.0）中，在37°C下浸泡2小时或过夜。数据由LC-MS采集，并通过基于Mascot概率的搜索引擎对Trastuzumab序列进行检索，随后在Skyline（MacCross实验室）进行定量分析。
应用
优秀的消化效率和高赖氨酸特异性，生成更多独特的肽，从而在复杂的蛋白质组学工作流程中更自信地识别蛋白质
在蛋白质组学应用中，蛋白水解酶的选择对于实现蛋白质识别和全面蛋白质组覆盖至关重要。高酶效率对于将复杂蛋白质混合物消化成适合LC–MS分析的肽至关重要。这提高了肽的产率，改善了序列覆盖率，并提高了识别低丰度蛋白的可能性。在此背景下，大量独特肽——尤其是未遗漏切割产生的肽——是酶性能的关键指标，因为它直接提升了蛋白质一致性识别和定量的信心。为了评估蛋白质组学环境下的消化性能，人类HeLa细胞裂解液使用LysCER和两种替代的Lys-C酶消化，并比较了独特肽的数量。消化后，肽通过磁珠上的蛋白质聚集捕获（PAC）进行净化，并用LC–MS进行分析。LysCERAT产生了最多独特肽和含有三种Lys-C酶零漏切的肽的最高比例。使用LysCERAT检测的全切割肽比例更高，表明其在复杂生物样本上的消化效率更高，从而使肽库比其他酶更具信息量和可解读性。
酶特异性是蛋白质组学工作流程中的另一个关键参数。高水平的氨基酸特异性确保了可预测的切割模式，并减少非特异性肽的数量。这反过来最大限度地减少了光谱复杂性，并减少肽与谱匹配时的歧义。评估了三批不同的LysCERATOR，赖氨酸特异性持续高，约为97–98%。观察到的批对批次重复性凸显了LysCERATOR在蛋白质组学工作流程中的鲁棒性和可靠性。
LysCERAT结合了赖氨酸特异性和消化效率，非常适合复杂的蛋白质组学工作流程。这些特征使得光谱更清晰，蛋白质鉴定更具信心，数据分析更稳健——尤其是对于具有大量潜在肽段分配的高度复杂样本。
应用
高效肽定位，最小漏切和高序列覆盖率，确保PTM识别自信。
高消化效率对于药物开发中抗体候选物的可靠肽谱定位至关重要。肽定位被常规用于确认初级序列、识别翻译后修饰（PTM）以及在开发和制造过程中监测产品质量。蛋白水解消化不完整或不一致会导致切割漏接，进而增加样本复杂度，降低序列覆盖率，并复杂化数据解释。这可能掩盖关键质量属性（CQA），降低PTM识别和定位的信心，并对可比性研究和监管提交产生负面影响。
为评估LysCERATOR在抗体候选肽定位中的表现，人类IgG1Trastuzumab被利用LysCERATOR和两种替代的商业化Lys-C酶——一种非重组酶和一种重组酶消化（见图1）。经过2小时消化，LysCERAT实现了更优的切割效率，91%的总肽强度对应于零缺失切割的肽段，而非重组Lys-C为88%，重组Lys-C为65%。经过隔夜消化后，LysCERATOR中零漏切的肽段比例增加到97%，非重组Lys-C为93%，而重组替代Lys-C则显著下降，仅为67%。
这些结果凸显了LysCERator在肽谱定位工作流程中优于其他商业产品更优的消化效率。高效的消化，即使消化时间较短，也几乎不遗漏切割，从而实现更快的周转，同时不影响数据质量。这在高通量分析环境和早期开发阶段尤为重要，因为速度和可重复性至关重要。为进一步证明LysCERATOR在肽定位中的效用，评估了Trastuzumab的序列覆盖率（见图2）。2小时后，序列覆盖率达到重链95.1%，轻链覆盖率达到95.3%。高序列覆盖率提高了使用LysCERATOR检测和定量翻译后修饰的信心，这在抗体治疗药物的全面表征中至关重要。
上海宝叶生物科技有限公司
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