新闻中心
News Center
[方法]1．配制4个50ulPCR反应混合液，包含：●去离子水，35．5ul●20×dNTP（每种5mmol/L），2．5ul●10×Vent聚合酶缓冲液，5．0ul●LMB3引物（10pmol/ul），2．5ul●VL—NotI引物（10pmol/ul），2．5ul●scFV基因模板DNA（100ng），1ul●VentDNA聚合酶（2单位），1．0ul2．在有加热盖的热循环仪内，加热反应混合液到94℃5分钟。3．以94℃1分钟、42℃1分钟、72℃2分钟的条件共循环30次...
[方法]1．配制1个50ul连接混合液，包含：●10×连接缓冲液，5uI●水，16ul●NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul），20ul●VcoI和NotI消化的scFv文库（100g/ul）,7ul●T4DNA连接酶（400U／ul），2ul2．16℃孵育反应液过夜。3．乙醇沉淀DNA并用70％乙醇洗涤沉淀1次。4．重悬DNA于10ul水中。5．用4份相同的2．5ul的DNA分别电转化到电感受态大肠杆菌TGl细胞中。6．确定文库容量，并将菌文库材抖储存于-70...
[方法]1．每个克隆用lml2XTY／amp／S1u30~C培养过夜，250r／min振荡。2．取50u1过夜培养物，加入到含有5ml2XTY／amp／0．1％glu的50ml试管内；并在30℃培养大约2小时，250r／Illin振荡，吸光度（A600）大约0．9。3．每管加入2．5ullmol／LIPTG诱导scFv表达（终浓度为500umol／L），并在30℃培养4h，250r／min振荡。在1个15mlFalcon试管内4000g离心15分钟，收集细胞。4．准备外周质提...
免疫组织化学（1HC）或称免疫细胞化学是一种方法学，根据特异性抗原—抗体反应的原理，检测组织或细胞内的抗原或抗体成分。IHC有一个很长的发展历史，已有半个世纪以上，自Coons创建免疫荧光组化技术以来，不断有人（或公司）推出更为敏感的方法，经过60多年的不断努力和发展，由zui初的免疫荧光直接标记法，逐步出现了间接法、免疫酶法、亲和细胞化学方法、免疫胶体金法，多聚物酶法（或称非生物素放大法）、CSA法、原位免疫PCR法及循环放大法等。目前提高免疫组化敏感性可通过如下几种途径来...
①胶体金溶液可以重复制备，其颗粒大小可以控制，可较容易进行免疫电镜的双重或多重标记；②金标探针有很高的电子密度，有特殊的分辨率，定位准确；③金标探针能发射二次电子和反射电子，是扫描电镜目前的标记物；④金标探针与组织细胞内的抗原结合后，可用银增强，大大提高了IHC的敏感性，是目前zui为敏感的IHC方法之一；⑤免疫金银染色方法无致癌性，使用较安全。胶体金技术是以胶体金作为一种标记物。胶体金是指金的水溶胶，它具有一般溶胶的特性。溶胶是指一种物质以或大或小的微小粒子分散在另一种物质...
（一）胶体金的颜色溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒子越小，分散度越高，则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说，粒子大小不同，呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红色的葡萄酒色；20～40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光，溶液呈深红色；60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光，溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5～60nm范围内，溶液...
[方法]1．建立以下连接反应：●载体DNA（pG6AppG6B，pG6C）（10ug）xul●cDNA片段（3～5ug）yul●10×连接缓冲液40ul●T4DNA连接酶（6WeissU/ul）5ul●水400ul2．在16℃过夜孵育。3．在70℃孵育30分钟，使T4DNA连接酶变性。4．加1体积的乙醇并振荡45秒，在14000g微离心机中离心10分钟，然后将上清液转移到另一新的微离心管中。5．加1体积的24/1（体积比）氯仿/异戊醇并振荡45秒，在14000g微离心机中离心...
[方法]1．加2～3ul纯化的连接反应物（zui大值为0.3ugDNA）到80ul的*0F’电转化感受态细胞中，轻轻摇晃混合。使用30ng（2ul）的pUCl9控制电转化效率。2．将细胞+DNA悬浮液转移到已冷却的0．2cm细胞电转化管，并冰浴3分钟。3，将GenePulserPlus电穿孔仪设置为2．5kV脉冲，电容器设为25uF，脉冲控制器设为200ns。4．用纸巾干燥电转化管，然后将它放在电转化箱中，使用一个脉冲（寄存时间常量必须为4．5～5．0毫秒）。5．立即加lml...
当前位置：
