Erythromycin A Production Plasmids 试剂

Erythromycin A Production Plasmids 试剂

一、质粒构成与关键参数

1）pHZT1（骨架：pET28a，5369 bp）

• 抗性：（Kan）

• 插入基因（13.2 kb）：

• eryBI–BVII（Erythromycin  B 环合成）

• ermE（Erythromycin 抗性基因）

• 启动子：T7；克隆位点：XbaI/SpeI

2）pHZT2（骨架：pET21c，~5.4 kb）

• 抗性：（Carb）

• 插入基因（13.2 kb）：

• eryCI–CVI（C 环合成）

• eryF/eryG/eryK（后修饰：羟基化、甲基化、糖基化）

• 启动子：T7；克隆位点：XbaI/SpeI

二、工作原理（E. coli 异源全合成）

1. 宿主：E. coli BL21 (DE3)（提供 T7 RNA 聚合酶）

2. 诱导：IPTG 诱导 T7 启动子，同步表达所有 ery 基因

3. 合成路径：

• Ⅰ 型聚酮合酶（DEBS）→ 6dEB（前体）

• 后修饰酶（eryF/G/K）→ 羟基化、甲基化、糖基化

• 终产物：Erythromycin  A（Er-A）

4. 优势：替代天然宿主（糖多孢红霉菌），周期短、易培养、产量高

三、核心优势

• ✅ 全合成：E. coli 一步生成Erythromycin  A，无需前体

• ✅ 高兼容：双质粒（Kan+Carb）稳定共存，无质粒排斥

• ✅ 强启动：T7 启动子，诱导后高表达

• ✅ 易操作：37℃常规培养，IPTG 诱导，无需特殊培养基

• ✅ 可改造：位点清晰（XbaI/SpeI），便于基因编辑 / 路径优化

四、标准实验方案

1. 转化

• 感受态细胞：BL21 (DE3)

• 共转化：pHZT1（Kan⁺）+ pHZT2（Carb⁺）

• 筛选：LB 平板（50 μg/mL Kan + 100 μg/mL Carb），37℃过夜

2. 培养与诱导

• 单菌落→LB 液体（同抗性），37℃摇至 OD₆₀₀=0.6–0.8

• 加 IPTG（1 mM），28℃诱导 16–24 h（低温利于折叠）

3. 检测

• 发酵液→LC-MS 或抑菌圈法（枯草芽孢杆菌）验证Erythromycin  A

Erythromycin A Production Plasmids 试剂

应用场景

• 异源合成：E. coli 生产Erythromycin  A，替代天然发酵

• 途径工程：改造 ery 基因簇，提高产量 / 生成衍生物

• 药物开发：构建Erythromycin 类似物库，筛选新型抗生素

• 代谢研究：聚酮合成、后修饰机制研究

上海宝叶生物科技有限公司

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