S-Adenosylmethionine (SAM) ELISA Kit试剂

S-Adenosylmethionine (SAM) ELISA Kit试剂

SAM被用作治疗抑郁症、肝病、关节炎和关节疼痛等疾病的药物或营养补充剂。

该免疫测定试剂盒用于测量可溶性形式样本中SAM的含量。

检测原理

这种直接的竞争性ELISA(酶联免疫吸附测定法)旨在测量样品中S-腺苷基-L-AdenosylmethionineSAM)的浓度。SAM与大分子偶联后固定于微孔板表面。标准品和样品被逐滴加入各孔中，随后加入针对SAM的HRP偶联抗体。样品或标准品中的游离SAM分子会与固定于微孔板表面上的SAM竞争与抗体结合的位点。弃去与孔内溶液混合后的溶液后，加入TMB底物溶液底物溶液在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下变蓝，加入终止液(酸性)后变为黄色。颜色的深浅与样品(或标准品)中SAM的含量成反比。使用微孔板分光光度计在450纳米波长下测量剩余溶液的光密度(OD450)。通过标准品绘制的标佳曲线可计算出样品中SAM的含量。

样本采集与储存

1.样本采集必须在4°C下进行。必要时通过离心去除沉滤，并尽快测试样品或储存在-20°C或更低温度。避免反复冻融循环。

2.避免样品中含NaN3，因其会失活辣根过氧化物酶(HRP)。样品，以避免或减少基质效应

3.某些未知因素可能对测定产生影响(基质效应)。使用样品稀释剂稀释样品，或制备与实际样品基质相同的基质标准品/

操作步骤

1.将所有试剂重新加热至室温并充分混匀。取适量孔板放入Ziploc袋中，密封后储存在-20°C。

2.向每个孔中加入30ul样品稀释液(空白孔)、标准品和样品。匀后避光保存

3.制备HRP偶联抗体溶液:用HRP抗体稀释液将HRP抗体按1:600的比例稀释，该溶液应在一周内用完。若需一周后使用，请按需配制。充分混

4.在除空白孔外的每个孔中加入70ulHRP标记抗体。

5.将板置于振荡器上摇晃以混合试剂，并用微孔板封口膜密封。在37°C下孵育1小时。

6.小心地揭去封膜，并弃去孔板中剩余的湾液。在每个孔中加入至少30微升洗漆液，保持此状态汉秒，然后去除洗涤液。重复上述步骤次以完成洗漆过程。或便用自动洗板机代普。

7.加入TMB底物，向每个孔加入100ul混合底物。轻轻摇晃并密封板子。在无光条件下于37°C孵育15分钟。

8.加入50u终止液以结束反应。

9.在15分钟内于450nm波长下测量每个孔的吸光度。根据空白孔设定零点。

数据处理

始终通过减去空白孔在450nm处的吸光度(OD450)来清除背景，该数值为测试孔的吸光度。

每个孔的比吸光度(标准品或样品)等于A/Aso，其中A是标准孔或样品孔的平均吸光度，As0是Ssd孔的平均吸光度。

标准曲线的创建:通过绘制每种标准品的结合率与x轴上的浓度对数之间的关系图，来构建标准曲线。使用二次多项式曲线来拟合数据(r>0.99)。可将样品的SAM水平通过将其结合率代入标准曲线方程中计算得出。若样品已被稀释，还需乘以稀释倍数。

注意

1.使用试剂和样品时若未重新加热或环境温度低于20°C，可能导致OD450值降低。

2.洗涤后额外干燥可能产生负面影响，例如标准曲线不佳和重复性差。洗涤后应立即进行下一步操作。

3.充分混匀溶液并清洗，因为这些操作会影响检测结果。

4.使用微孔板密封器封好培养板，并在孵育过程中避免光照。

建议为标准和样品设置重复孔，并采用二次多项式进行标准曲线拟合(相关系数r>0.99)。质控管的检测浓度应处于检测范围内。

6.由于基质效应，样品孔的吸光度可能高于SO标准孔。在此情况下，将样品至少稀释十倍。若稀释10倍后仍无法检测到

SAM水平，则使用与待测样品相同的基质制备一组新的标准品并重新测量。

7.浓缩洗涤液可能会结晶。警告:稀释前需充分溶解盐分。

8.微孔板密封器应为一次性用品，以避免交叉污染。

9.底物应避光保存。

10.停止溶液是稀释硫酸。避免直接接触皮肤和其他物品。

储存与有效期

存储条件:除HRP底物和终止液需储存在2-8°C外，其余所有成分和试条均可冷冻保存。

有效期:冷藏保存时，自发货日起约6个月。如近期不打算使用，可将检测板放入冰箱长期储存以获得更佳结果。

HRP-抗SAM抗体、标准品、HRP抗体和采样液应冷冻保存以延长储存时间或获得更佳结果。

S-Adenosylmethionine (SAM) ELISA Kit试剂

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